血鈣濃度檢測試劑盒說明書 |
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血鈣濃度檢測試劑盒說明書 微量法 注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。 測定意義： 血鈣幾乎全部存在于血漿中，所以血鈣主要指血漿鈣。血漿鈣有離子鈣和結(jié)合鈣兩種形式， 其中只有離子鈣直接起生理作用，它與結(jié)合鈣處于動態(tài)平衡，并受血液 pH 的影響。血鈣水 平與多種重要的生理功能相關(guān)，過高或過低都會影響正常生理功能。本試劑盒用于檢測血液 中游離鈣濃度。 測定原理： 在強(qiáng)堿溶液中游離鈣與 GBHA 反應(yīng)生成紅色鈣-GBHA 復(fù)合物，在 520nm 有吸收峰；通過測定 520nm 吸光度，計算游離鈣濃度。 自備儀器和用品： 可調(diào)式移液槍、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、石英比色皿/96 孔板、無水甲醇、丙酮和蒸餾水。 試劑組成和配置： 試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。 試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。 試劑三：液體×1 瓶（空瓶，試劑自備）。取10 mL試劑瓶。依次加入9 mL無水甲醇和1mL丙酮，蓋緊混勻即可。 標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1 瓶，3μmol/mL，4℃保存。 血鈣濃度測定操作： 1. 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到520nm，蒸餾水調(diào)零。 2. 空白管：取石英比色皿/96孔板，依次加入蒸餾水12μL，試劑一50μL，混勻；再加入試劑二50μL，混勻；zui后加入試劑三100μL，混勻；靜置5min后于520nm測定吸光度A空白管。做一個空白管即可。 3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取石英比色皿/96孔板，依次加入標(biāo)準(zhǔn)液12μL，試劑一50μL，混勻；再加入試劑二50μL，混勻；zui后加入試劑三100μL，混勻；靜置5min后于520nm測定吸光度A標(biāo)準(zhǔn)管。做一個標(biāo)準(zhǔn)管即可。 4. 測定管：取石英比色皿/96孔板，依次加入血液樣品12μL，試劑一50μL，混勻；再加入試劑二50μL，混勻；zui后加入試劑三100μL，混勻；靜置5min后于520nm測定吸光度A測定管。記為 A 測定管。 注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次，做三次重復(fù)。 血鈣濃度計算公式： 血鈣含量(μmol/mL)= [C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 樣品總=3×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) C 標(biāo)準(zhǔn)液：3μmol/mL； V 樣總：樣品總體積，1 dL=100 mL。
注意事項： 1. 宜早晨空腹采血，并且采血后應(yīng)該盡快完成測定。 2. 靜置 5 分鐘后立即測定。 3. 加試劑三后，應(yīng)該在 30 min 內(nèi)完成該管的測定。 4. zui低檢出限為0.1μmol/mL。 |
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