技術(shù)支持Article
酶活性測(cè)定常用的方法有兩種
點(diǎn)擊次數(shù)：657 更新時(shí)間：2022-07-20
酶活性測(cè)定法是利用酶能專一而高效地催化化學(xué)反應(yīng)的性質(zhì)，通過測(cè)定酶促反應(yīng)速度來(lái)檢知體液等生物樣品中某種酶的含量和活性的分析技術(shù)。
酶促反應(yīng)速度的測(cè)定可采用兩種方式：
一、測(cè)定完成一定量反應(yīng)所需的時(shí)間；二、測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)的酶促反應(yīng)量。前者稱為終點(diǎn)法，后者稱為動(dòng)力學(xué)法。
終點(diǎn)法
該方式是在特定條件下，將樣品中要檢知的酶作用一定量的底物，然后根據(jù)反應(yīng)進(jìn)行到某一程度(即達(dá)到某一指標(biāo))所需要的時(shí)間長(zhǎng)短來(lái)估計(jì)酶的活力。
其一個(gè)發(fā)展是采用檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)進(jìn)行連續(xù)跟蹤，并在反應(yīng)達(dá)到某一程度時(shí)，精確地自動(dòng)記錄所需要的時(shí)間，這就是酶分析自動(dòng)化中的固定濃度法；另一個(gè)發(fā)展是作成簡(jiǎn)便的酶檢測(cè)紙片。
動(dòng)力學(xué)法
該方式測(cè)定原理是：在一定條件下，酶促反應(yīng)速度和酶濃度成正比，因此測(cè)得反應(yīng)速度就需要求得酶濃度。待測(cè)的酶濃度是影響反應(yīng)速度的因素，其他因素都應(yīng)處于酶發(fā)揮催化作用的水平，為此應(yīng)選擇適宜的底物濃度、緩沖體系、溫度，并向反應(yīng)系統(tǒng)中添加必要的輔助因子。
常用的測(cè)定方法有取樣法和連續(xù)法。
取樣法是在酶反應(yīng)開始后不同的時(shí)間，從反應(yīng)系統(tǒng)中取出一定量的反應(yīng)液，并用適當(dāng)方法停止其反應(yīng)，再根據(jù)產(chǎn)物和底物在化學(xué)性質(zhì)上的差別進(jìn)行分析，求得單位時(shí)間內(nèi)酶促反應(yīng)的變化量。
連續(xù)法則是基于底物和產(chǎn)物在物理化學(xué)性質(zhì)上的不同，在反應(yīng)過程中對(duì)反應(yīng)系統(tǒng)添加酶的變性劑以終止反應(yīng)。常用的連續(xù)測(cè)定法是光吸收測(cè)定法，即根據(jù)產(chǎn)物和底物在某一波長(zhǎng)或波段上有明顯的特征吸收差別而建立起來(lái)的連續(xù)觀測(cè)方法。幾乎所有的氧化還原酶都可用此法測(cè)定，此外如熒光法、旋光法、電化學(xué)法也是常用的連續(xù)測(cè)定方法。
對(duì)不易直接測(cè)定的反應(yīng)，可使用酶偶聯(lián)分析法，即用過量、專一的“偶聯(lián)工具酶”，使被測(cè)反應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行到某一可直接測(cè)定的階段。
近年來(lái)，酶活性的測(cè)定工作正向兩個(gè)方向發(fā)展，一是超微量酶活的靈敏測(cè)定，二是實(shí)現(xiàn)測(cè)定過程的自動(dòng)化控制。
